新冠状病毒新在哪里？如何检测它？

　　一、新冠状病毒（2019-nCoV）简介

　　在武汉发现的新冠状病毒2019-nCoV为单链正链RNA病毒。在分类学上，2019-nCoV属于网巢病毒目（Nidovirales）、冠状病毒科（Coronaviridae）、正冠状病毒亚科（Orthocoronaviridae）的Beta冠状病毒属（Betacoronavirus），同属中还包括SARSr CoV、MERSr CoV等其它可感染人类的冠状病毒。

　　通过报道的全基因组比对发现，2019-nCoV与SARSr CoV、MERSr CoV平均分别有~70%和~40%的序列相似性。且其与宿主细胞相互作用的spike基因（编码S-蛋白）有更大的差异性。

　　SARS病毒的 S-蛋白和MERS病毒S-蛋白分别通过与人ACE2蛋白或DPP4蛋白互作结合来感染呼吸道上皮细胞。在S-蛋白的宿主受体互作区（RBD区），2019-nCoV与SARSr CoV比较相近，但是与MERSr CoV差异较大，首先排除了2019-nCoV病毒S-蛋白与DPP4互作感染人的可能。

　　通过分子结构模拟计算发现，虽然2019-nCoV病毒S-蛋白中与人ACE2蛋白结合的5个关键氨基酸有4个发生了变化，但变化后的氨基酸，却整体性上非常完美的维持了SARS病毒S-蛋白与ACE2蛋白互作的原结构构象。

　　尽管武汉新型冠状病毒的新结构与ACE2蛋白互作能力，由于丢失的少数氢键有所下降（相比SARS病毒S-蛋白与ACE2的作用有下降），但仍然达到很强的结合自由能（-50.6 kcal/mol）。这一结果说明武汉冠状病毒是通过S-蛋白与人ACE2互作的分子机制，来感染人的呼吸道上皮细胞。

　　二、新冠状病毒（2019-nCoV）的检测

　　目前的检测都是基于提供的病毒基因组的测序，不同的公司和机构设计开发不同的检测试剂或测试盒，但基本原理和方法都大体一样。卫计委对这次新型新冠状病毒归为乙类传染病，但目前按甲类传染病控制。作为医学检测实验室要关注的是检测样品传送、检测和样本保存等的生物安全的控制，同时检测结果的确认和报告。

　　（一）送检样本的要求：

　　按照卫计委有关医学生物安全要求进行。根据生物安全相关规定，新冠状病毒2019-nCoV的送检样本需要满足以下要求：

　　1.样本：必须在符合生物安全规范的场所进行取样和包装；

　　2.容器：密封、无菌，耐高/低温度范围-40℃～55℃（如需液氮保存时需耐受 -196℃），耐压范围≥ 95 KPa，防水、防破损、防泄漏，生物危险性标识、提示说明、放置方向等信息完整清晰；

　　3.标签（贴在主容器外）：类别、编号、名称、容量；

　　4.相关资料（置于防水袋内，贴于辅助容器外）：数量、危险性申明、鉴定书、发送接收者信息。

　　（二） 检测指导原则：

　　1.应该在生物安全二级（BSL-2）以上级别设施中进行相关操作；

　　2.同时收集上呼吸道（URT）和下呼吸道（LRT）的标本，通过 RT-PCR 进行 2019-nCoV 核酸检测；

　　3.仅在无法使用 RT-PCR 时才建议使用血清学进行诊断；

　　4.对于疑似患者，特别是患有肺炎或严重疾病的患者，单个 URT 样本阴性不能排除2019-nCoV感染的可能，应增加LRT样本，LRT（相对于 URT）样本更可能呈阳性；

　　5.对于已经确诊 2019-nCoV 感染的患者，应重复收集样本（至少每 2-4 天收集一次），以证实病毒清除。直到患者出现两个连续的至少间隔 24 小时的全阴性结果（URT 和 LRT 样本均为阴性），可诊断临床康复。

　　（三）样本检测实验步骤：

　　对于新病毒的RT-PCR测试，不同来源的试剂盒要求的实验操作不尽相同，应根据试剂盒说明书要求进行操作。

　　以下是典型的RT-PCR操作步骤：

　　1.取样（URT 和 LRT 样本）；

　　2.取适量样本与核酸提取液充分混匀；

　　3.对混合液进行金属浴，95℃温育5 min，4℃冷却3 min；

　　4.对处理后的混合液进行实时荧光检测。

　　三、检测相关的仪器及材料

　　（一）相关的仪器设施

　　1.实时荧光PCR仪

　　2.全自动核酸分离系统

　　3.高压灭菌锅

　　4.生物安全柜（符合要求的）

　　5.冷冻离心机（10000转/分以上，气溶胶防护操作）

　　6.移液枪 （气溶胶防护操作）

　　7.符合生物安全要求的隔离条件实验室或区域。

　　（二）检测试剂

　　1.病毒核酸检测荧光试剂（或试剂盒）

　　2.核酸提取试剂（或商业化的提取试剂盒）

　　3.ＲT-PCR试剂

　　（三）相关器材

　　1.TIP头，离心管，手套，联排PCR管等。

　　2.人的安全防护：防护服、手套、N95口罩、 防护眼罩。生物安全消毒袋、有效的消毒液。

　　以上简要介绍，供参考。

　　作者简介：朱金国，男，研究员，毕业于武汉大学病毒学及分子生物系，长期从事检测技术工作。