GB5009.168—2016《食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》解析

　　GB 5009.168—2016《食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》于2016年12月23日发布，2017年6月23日正式实施，至今已有半年之久。小编将结合自身在检测过程中遇到的问题，谈一下对标准的理解。

　　正如标准前言中提到的，相对于GB/ 5009.168—2003(已废除)，GB 5009.168—2016修改了标准名称，增加了内标法和归一化法，修改了原标准中的色谱柱。

　　此外，GB 5009.168—2016更是对众多脂肪酸检测标准的整合，共有6个国家标准，2个行业标准被替代，详见表1。

　　此次标准整合，依据检测结果处理方式不同分为三种方法，即内标法，外标法和归一化法。三种方法中均给出了相应样品的前处理方法，即脂肪酸甲酯化方法。并对样品前处理方法、实验试剂、结果处理方式、方法适用范围等方面作了统一。

　　表1 被GB 5009.168—2016替代的标准及其适用范围

　　1、整合样品前处理方法

　　食品中脂肪酸检测涉及标准多，除表1中被替代的标准外，还有GB5009.257-2016《食品安全国家标准 食品中反式脂肪酸的测定》和GB5413.36-2010《婴幼儿食品和乳品中反式脂肪酸的测定》。不同脂肪酸检测方法区别主要集中在样品前处理过程，即所使用甲酯化方法不同。但其基本原理均是通过采用碱性甲醇溶液将脂肪酸甲酯化，后通过毛细管色谱柱分离，氢火焰检测器(FID)检测。

　　常见脂肪酸甲酯化方法有GB/T17376—2008中列出的三氟化硼法，三甲基氢氧化硫法、酯交换法和GB5413.27—2010 第一法 乙酰氯-甲醇甲酯化方法。这四种方法甲酯化效率不一，适用样品范围也不同。有研究表明，这四种方法中，乙酰氯-甲醇法具有较好的甲酯化效率。在GB 5009.168—2016中保留了三氟化硼法，乙酰氯-甲醇和酯交换法，剔除了三甲基氢氧化硫法。

　　2、统一了实验试剂

　　各标准规定的甲酯化过程中，使用的碱性甲醇溶液不一(主要是氢氧化钾或氢氧化钠)，浓度也存在相应差异(比如，氢氧化钾甲醇溶液浓度从0.4~2 mol/L)，甲酯化催化剂不同(三氟化硼甲醇溶液，乙酰氯甲醇溶液或者盐酸—甲醇溶液);同时，使用萃取剂也不相同(正己烷，正庚烷或异辛烷)。

　　针对试剂不一的情况，GB 5009.168—2016水解提取法统一采用正庚烷为溶剂，2%氢氧化钠甲醇溶液皂化，15%三氟化硼甲醇溶液催化甲酯化。酯交换法采用异辛烷为溶剂，2 mol/L氢氧化钾甲醇溶液皂化并甲酯化。

　　此外，乙酰氯-甲醇法仍然沿用GB 5413.27中第一法，用甲苯为溶剂，加入乙酰氯甲醇溶液催化甲酯化。

　　3、整合结果处理方法

　　食品中脂肪酸检测涉及脂肪酸相对含量(即脂肪酸占脂肪中百分含量，以%表示)，脂肪酸绝对含量检测(即脂肪酸在食品中的准确含量，以g/100g表示)。在常规检测中，主要采用内标法或者外标法来计算肪酸绝对含量检测，采用面积归一化法来计算表示脂肪酸相对含量。

　　1)内标法，是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物质与内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。内标法用于采用水解—提取法和酯交换法甲酯化的样品中。此法主要整合了GB/T22223—2008和GB/T17376—2008中5.6.2.1。

　　2)外标法，即用已知浓度标准品的峰面积会峰高与其对应的浓度做一条标准曲线，测得样品的峰面积或峰高，通过标准曲线回归方程，算出样品对应的浓度，是最常用的一种定量方法。外标法用于水解—提取法、乙酰氯-甲醇法和酯交换法甲酯化的样品。相比于内标法和面积归一化法，此法还整合了GB5413.27—2010 第一法 乙酰氯-甲醇法。

　　3)归一化法，即把所有峰的组分含量之和按照100%计的定量方法。脂肪酸检测采用的是面积归一化法，面积归一化法的假设是样品中所有脂肪酸均能出峰。

　　4、汇总了方法适用范围

　　脂肪酸检测样品类型多。GB 5009.168—2016根据甲酯化方法适用性，针对三种甲酯化方法给出了适用范围，而不是根据样品基质制定标准。避免了由于标准太多，造成使用混乱，实验结果存在争议等问题。标准指出，水解-提取法适用于食品中脂肪酸的测定，酯交换法适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂样品，乙酰氯-甲醇法适用于含水量小于5%的乳粉和无水奶油样品的脂肪酸含量测定。

　　5、其他

　　GB5009.168—2016规定了结果的表达方式，均保留三位有效数字;结果单位：内标法和外标法均为g/100g，归一化法均为%;在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。

　　建议：该如何选择方法

　　1、 根据样品类型，参考标准方法的适用范围。

　　2、 根据需要出具的检测结果形式选择方法。

　　TIPS

　　1、实验操作时，一定养成查看脂肪酸在仪器上响应的习惯。实验室用脂肪酸标液在仪器上响应稳定，如果出现检测结果偏差大的情况，需要考虑标物响应以及甲酯化效率是否出现问题，可以通过将甘油三酯标物甲酯化后查看甲酯化效率来判断。

　　2、GB 5009.168—2016中给出的37中脂肪酸甲酯标液，是食品中主要的脂肪酸形式。但是，在一些特殊样品，比如鱼油样品中，存在C18:1n5，C18:4n3和C22:5n3(DPA)等不在37种脂肪酸甲酯标液内的脂肪酸。在归一化法时，可能会因为峰位对不上，误删掉这些峰，从而导致检测结过偏高。

　　3、对于在气相色谱法上无法通过保留时间确定的峰位，可以采用GC-MS进行检索定性确认。

　　4、GB 5009.168—2016中内标法是口香糖等样品中总脂肪检测最为有效的一种方法。

　　参考文献：

　　【1】马亭,陈文锐,胡国昌,张展霞.深海鱼油中脂肪酸的分析[J].分析化学研究简报.1999,27(4):415-418。

　　【2】黄峥,盛灵慧,马康,高运华,王晶,李保山.5种脂肪酸甲酯化方法的酯化效率研究.中国油脂.2013,38(9):86-88.