病毒检测方法在病毒灭活和去除验证中的应用和比较-默克密理博生物制药工艺基础课堂十三
近年来，随着单抗市场在国内的兴起，对病毒清除技术（灭活和去除）的验证也提出了更高的要求，从最初的低pH孵育到最近几年除病毒膜过滤技术在病毒清除方面的成熟的应用，包括层析技术也逐渐被大家重视，从而进一步提高下游工艺对于病毒的总的对数清除率。 在验证实验中，不管是哪种病毒清除技术，都是通过人为挑战病毒，然后采用感染力或者其他适合的分析方法来估测样品中的病毒滴度，然后测量出该步骤的病毒对数清除率，因此选择一种合适的病毒检测分析方法对于病毒对数清除率的计算非常重要。 在病毒清除验证中，病毒的检测分为三种情况： 第一种情况根据病毒的感染性来定量病毒的滴度，有两种方法，第一种称为病毒空斑形成实验，。第二种方法称作TCID50半数细胞培养物感染量实验，这种检测方法是以细胞培养物中产生细胞病变效应（Cyto-pathic Effect，CPE）为基础的检测手段。 第二种情况是定量PCR的方法，尽管空斑形成和TCID50这两种以细胞为基础的感染性分析被视为病毒清除研究中的估测病毒滴度的金标准，qPCR方法已经被迅速接受为病毒清除研究中估测病毒粒子的替代和补充方法。 第三种情况是直接用电子显微镜来计数病毒数目，但是由于该方法不能区分感染性病毒颗粒与非感染性病毒颗粒，因此无法判断病毒的感染力，主要用于细胞发酵液的病毒初始量的计算中，因此着重介绍空斑形成实验，TCID50实验和qPCR三种检测方法。 本次讲座将主要介绍在生物下游病毒清除技术中应用的病毒检测方法，以及不同病毒检测方法的区别以及适用范围。
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2015-08-19
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