亚硝胺的分析挑战和有效管理研讨会纪要分享

 2024 年 10 月 29 日星期二，ThermoFisher Scientific 举办一场关于 NDSRI 分析的网络研讨会，介绍和讨论辅料中的亚硝酸盐、亚硝酸盐和 NDSRI 分析方法和挑战、NDSRI 风险评估。

参与演讲者其中包含Healthcare KGaA QC 系统首席专家、阿斯利康高级首席科学家、默克公司高级经理、阿斯利康副首席科学家、Lhasa Limited 高级全球联盟经理。

以下研讨会讨论的内容纪要：

强调了制药行业在亚硝胺方面面临的广泛挑战，特别是 NDSRI：

· 亚硝胺前体的普遍性：仲胺和叔胺是亚硝胺的化学前体，在许多药物中很常见。一项大规模分析发现，药物数据库中 41.4% 的活性药物成分 （API） 和 33% 的杂质是仲胺或叔胺。

这些胺在药物开发中起着至关重要的作用：它们是化学反应中的重要反应物，通过充当氢键供体和受体来促进药物溶解度，并且它们的 3D 结构促进了药理学相互作用。由于仲胺和叔胺在药物中的普遍性和重要性，完全避免使用仲胺和叔胺并不是一个可行的解决方案。

· 严格的监管限值和分析测试挑战：监管机构对亚硝胺的可接受摄入量水平施加了严格的限制，尤其是 NDSRI。这带来了分析挑战，因为所需的定量限 （LOQ） 通常在十亿分之几的范围内，从而突破了当前分析技术的界限。检测如此微小的量需要高度灵敏的技术，并大大增加了药物开发过程的成本。一位发言者指出，他们的公司在亚硝胺相关费用上花费了大约 2000 万美元，包括分析设备、合同实验室、毒理学测试和人员。将这笔支出外推到整个制药行业，表明到目前为止，亚硝胺检测的总支出约为 40 亿美元。

· Ames试验的局限性： Ames试验是一种广泛使用的评估化学品诱变潜力的方法，由于担心其在检测诱变性 NDSRI 方面的敏感性而受到审查。历史数据表明，Ames 测试可能会产生假阴性，无法识别潜在的致癌 NDSRI。这导致监管机构采取了预防措施，对 NDSRI 等众所周知的强效亚硝胺（如 NDMA 和 NDEA）的严格限制应用于 NDSRI，即使这些 NDSRI 的致癌数据有限。这种保守的方法需要更低的检测限，从而进一步加剧了分析挑战。

· CPCA 的影响和局限性：2023 年 7 月引入的致癌效力表征方法 （CPCA） 根据亚硝胺的效价评分对亚硝胺进行分类，从而缓解了一些问题。这种分类导致了更广泛的可接受摄入量水平，从每天 18 到 1500 纳克，许多 NDSRIs，尤其是那些来自仲胺的 NDSRIs，属于可接受摄入量较高的较低效力类别。虽然 CPCA 缓解了眼前的危机，但消息人士指出了一些限制和需要改进的领域。一位发言者表示，希望未来能提高目前设定为每天 1500 纳克的第 5 类限值，以适应根据新出现的安全数据可能需要更高限值的 NDSRI。

· 监管差异和不确定性：人们一直担心监管机构之间在如何解释 NDSRI 的安全数据方面缺乏一致性，尤其是 FDA 和欧洲观点之间。最近在 9 月份对 FDA 指南的更新进一步增加了复杂性，引入了新的风险因素，收紧了测试要求，并建议使用清除剂和 pH 调节等缓解策略，其有效性在行业内仍然存在争议。这些不确定性和差异凸显了对 NDSRI 风险评估和管理采取更全面和全球统一的方法的必要性。

· 辅料中的亚硝酸盐污染：辅料中的亚硝酸盐杂质是药物制剂中的非活性成分，构成了重大挑战，因为它们在制造或储存过程中会与原料药中的胺反应形成亚硝胺。因此，控制辅料中的亚硝酸盐水平对于减轻亚硝胺的形成至关重要。已经建立了各种辅料中亚硝酸盐含量的协作数据库，提供了有关不同批次和供应商之间亚硝酸盐含量变化的宝贵信息。然而，简单地将辅料标记为“高亚硝酸盐”或“低亚硝酸盐”是不够的，因为制剂中使用的辅料量会显著影响整体亚硝胺风险。有必要更细致地了解辅料中的亚硝酸盐水平及其对最终药品中亚硝胺形成的影响。

· 亚硝酸盐检测的难点：由于亚硝酸盐的固有特性：体积小、极性高和易反应性，分析辅料中的亚硝酸盐含量是一项重大的分析挑战。传统的反相 HPLC 是分析实验室的支柱，不适合保留和分离亚硝酸盐。离子色谱法等特定技术通常与电导检测相结合，通常用于亚硝酸盐分析。另一种方法涉及衍生化，其中亚硝酸盐通过紫外光谱或质谱等技术进行化学修饰以提高其可检测性。仔细的样品制备对于避免在样品处理过程中因氧化成硝酸盐或人工生成亚硝酸盐而损失亚硝酸盐至关重要。一项涉及 6 个实验室的比较研究显示，硬脂酸镁中测得的亚硝酸盐水平存在显著差异，突出了样品制备方法（尤其是超声处理）对结果的影响。

· NDSRI 测试的复杂性：由于 NDSRI 可接受的摄入量水平低，分析 NDSRI 带来了独特的挑战，需要高度灵敏的分析技术来避免假阳性和假阴性。样品制备过程中原位形成亚硝胺的风险增加了另一层复杂性，需要对实验条件进行细致的控制，例如 pH 值和溶剂选择，以防止人为产生 NDSRI。此外，许多 NDSRI 缺乏市售参考标准品，因此需要复杂的合成和纯化过程来确保分析的准确性和可靠性。合成 NDSRI 标准品有其自身的一系列挑战，包括可能导致形成错误化学结构的不需要的副反应。这些挑战凸显了对稳健分析方法和细致质量控制措施的需求，以确保 NDSRI 测试的准确性和可靠性。

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