软胶囊中花青素（以原花青素计）的测定方法验证

软胶囊中花青素（以原花青素计）的测定方法验证

西安国联质量检测技术股份有限公司

食品事业部：任乐

一、目的：对用《保健食品检验与评价技术规范》（2003版)中“保健食品中原花青素的测定”方法测定“软胶囊”中花青素的含量进行方法适用性验证 。
二、验证内容：方法适用性验证包括检出限、线性范围、重复性、回收率、方法专属性。
三、验证方法：
1  范围
    本标准适用于软胶囊中花青素（以原花青素计）的含量测定。
2  原理
原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。本法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。
3  试剂
实验室用水为双蒸馏水，所用试剂为分析纯级。
3.1 甲醇 分析纯。
3.2 正丁醇 分析纯。
3.3 盐酸  分析纯
3.4 硫酸铁铵  NH₄Fe(SO₄)₂·12H₂O溶液：用浓度为2mol/L盐酸配制成2%（w/v）的溶液。
3.5 原花青素标准品  来源：上海源叶生物科技有限公司  批号:YA0429YA14。
4  仪器和设备
4.1超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司 型号：KQ5200B
4.2电子天平：沈阳龙腾电子有限公司 型号：JM-B10002 精度：0.0001g
4.3分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司 型号：TU-1901或同等程度仪器
  以上仪器符合检测要求。
5  试样处理
样品提取：挤出软胶囊内容物，搅拌均匀，称取50-100mg胶囊内容物置于小烧杯中，用20mL甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50mL容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。
6  测定
标准曲线绘制：称取原花青素标准品10.27mg溶于甲醇置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，该原花青素储备液的浓度为1027.0μg/mL。分别吸取原花青素储备液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。
将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取6mL置于具塞锥瓶中，再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1.0mL试样溶液，混匀，置沸水浴回流，精确加热 40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于546nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。
7  公式
试样花青素（以原花青素计）含量按下式进行计算。

式中：X—样品中花青素（以原花青素计）的含量，g/100g；
A—样品测定液中原花青素的含量，μg；m—样品质量，mg；
V-待测样液总体积，mL。
计算结果保留三位有效数字
四、验证数据
1 线性范围
以原花青素含量（C）为横坐标，吸光度值（A）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程：A=0.0038c+0.0035  R²为0.9996。

原花青素含量(μg)	0	10.27	25.68	51.35	102.7	154.05
A	0	0.043	0.096	0.205	0.392	0.580

以上结果表明原花青素在0-154.05μg范围内，吸光值与原花青素含量线性良好，符合要求。
2 检出限
以零点为参比，同时在546nm处对标准曲线零管进行20次测定，计算标准偏差，以3倍标准偏差值相对应的含量即位检出限。
经计算的得出，当称量为100mg时，其检出限为21.5mg/kg，符合软胶囊对浓度的要求。
3 重复性
称取6份试样按照上述处理方法进行试样处理，分别吸取适量样液进行比色，求得样液中花青素量。

测定编号	1	2	3	4	5	6
样品花青素（以原花青素计）含量g/100g	2.193	2.162	2.148	2.135	2.169	2.187
平均值g/100g	2.17
相对标准偏差%	1.0

由上表可知，试样中花青素（以原花青素计）测定的重复性均值为2.17g/100g，RSD值为1.0%，符合规定。
4 准确度
在进行重复性试验基础上，同时进行加标试验，加标量分别为1.74g/100g，2.17g/100g，2.60g/100g结果见下表：

测定编号	1	2	3	4	5	6
加标后实际含量g/100g	3.81	3.89	4.32	4.27	4.59	4.62
理论加标量g/100g	1.74	1.74	2.17	2.17	2.60	2.60
加标样品含量g/100g	1.64	1.72	2.15	2.10	2.42	2.45
加标回收率%	94.3	98.8	99.1	96.8	93.1	94.2

由上表可以看出软胶囊中花青素（以原花青素计）测定的加标回收范围在92%-105%，符合规定。
5 专属性

配制2个浓度梯度的原花青素标准溶液，1个样品处理液，1个试剂空白，按照上述处理方法进行处理，经过全波长分别扫描原花青素标准溶液，样品，试剂空白，如图所示可以看到原花青素标准品在546nm附近出现最大吸收峰，且样品在此波长处无干扰，故其专属性符合要求。

综上所述：从检出限、线性范围、重复性、准确度、方法专属性测试结果可知，均符合方法要求，本实验方法符合软胶囊花青素（以原花青素计）的测定。

维权声明：本文为T130554原创作品，本作者与（仪器信息网/我要测网）是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。